Fabian Dassau

• Ziel der Arbeit war es, die Möglichkeit der in‒situ Markierung (ISH) durch das CRISPRCas9-System aus Streptococcus pyogenes zu nutzen, um damit ein chromogenes Detektionsverfahren für spezifische DNS-Sequenzen zu entwickeln (chromogene CRISPR-ISH). Das bisherige CRISPR-FISH-Verfahren von [Ishii et al. 2019] nutzte als Signalgeber Fluoreszenzfarbstoffe. Nachteilig ist, dass die für den Nachweis von Fluoreszenzsignalen nötige Technik wie Fluoreszenzmikroskop und -kamera kostenintensiv ist. Dadurch sind diese technischen Voraussetzungen für kleine Labore oder Bildungseinrichtungen häufig nicht erschwinglich. Weiterhin werden Fluoreszenzsignale nach wiederholtem Lichtkontakt instabil, wodurch die so markierten Präparate nicht mehrmals betrachtet werden können und für den wiederholten Gebrauch nicht geeignet sind. Die in dieser Arbeit entwickelte Methode sollte es ermöglichen, das Prinzip der CRISPR-Cas-basierten Markierung zu nutzen, ohne den Nachteilen der Fluoreszenz zu unterliegen. Um dieses Ziel zu erreichen, wurde die CRISPR-FISH Methode sukzessive umgestaltet. Die bisher eingesetzten Fluoreszenzfarbstoffe wurden ersetzt. Die Zellkernfärbung (bisher durch DAPI) und die Visualisierung der Ribonukleoproteine (bisher durch Atto550) sollte mit nicht-fluoreszenten Farben realisiert werden. Die Ergebnisse sollten als Dauerpräparte so konserviert werden, dass diese beliebig häufig mit einem Lichtmikroskop betrachtet werden können.