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Der visuelle mikroskopische Spermanachweis gilt bis heute als aussagekräftigster Nachweis von Spermien in der forensischen Fallarbeit. Anhand der markanten Zellmorphologie kann ein Spermium von anderen Zellen und Partikeln unter dem Mikroskop abgegrenzt und unterschieden werden. Voraussetzung hierfür sind jedoch eine zuverlässige Aufarbeitungsmethode, um die Spermien eines Asservats auf einen Objektträger zu überführen und eine valide Färbemethode, welche die Spermien erst sichtbar macht.
Zielsetzung dieser Arbeit ist es, eine zeitsparende und effiziente Färbemethode zu finden, die in der praktischen Laborarbeit für den mikroskopischen Spermanachweis sicher angewandt werden kann. Verglichen werden hierfür im Folgenden die lichtmikroskopische Kernechtrot-Pikroindigokarmin- und die fluoreszenzmikroskopische SPERM HY-LITER-Färbung. Weiterführend werden reale Fallproben auf Spermien untersucht, um somit praxisnahe Gewissheit über die Effizienz der Methoden zu erlangen.
This work deals with the construction of a microscope for combined total internal reflection fluorescence (TIRF) and confocal microscopy. It is especially designed for single-molecule fluorescence spectroscopy. The design of the microscope body is based on the miCube (Hohlbein lab, Wageningen University, NL). The excitation and detection pathways were adapted to allow both TIRF and confocal illumination as well as camera and pointdetection for two color-channels to allow single-molecule Förster resonance transfer measurements