Refine
Document Type
- Bachelor Thesis (1)
- Master's Thesis (1)
Language
- German (2)
Keywords
- Tissue Engineering (2) (remove)
Institute
In der regenerativen Medizin, insbesondere beim Tissue Engineering, spielt die natürliche extrazelluläre Matrix eine große und immer bedeutsamere Rolle. Ein wichtiger Schritt für die medizinische Anwendung ist die Probenvorbereitung. Um die genaue Zusammensetzung des fertigen Produkts bestimmen zu können, muss eine einheitliche Methode für die Extraktion der Bestandteile zur Verfügung stehen. Ein anderer Teil der Probenvorbereitung ist die Dezellularisierung. Um bei der Anwendung in der regenerativen Medizin Abstoßungsreaktionen zu vermeiden, sollen die Zellen des zur Herstellung des Produkts verwendeten Gewebes nahezu vollständig entfernt werden. In dieser Arbeit wurde eine Methode zur Extraktion der extrazellulären Matrix optimiert und etabliert. Zusätzlich wurden verschiedene Dezellularisierungsansätze für die Gewebe untersucht. Die Ergebnisse zeigen, dass eine Extraktion mit dem GuHCl-Puffer für 24 beziehungsweise 48 h gute Ergebnisse bei der anschließenden Evaluation mittels Massenspektrometrie mit sich bringt. Allerdings ist der Erfolg der Extraktion stark gewebeabhängig. Für die Dezellularisierung hat sich die Anwendung des pH-WechselVerfahrens als wirksam erwiesen. Jedoch konnten mit Hilfe der gewählten Bedingungen die bestehenden Grenzwerte für eine erfolgreiche Dezellularisierung nicht erreicht werden.
Die vorliegende Masterarbeit befasst sich mit der Thematik der vergleichenden Untersuchung zur Ausprägung sehnenspezifischer Marker in Scaffold- versus Sphäroid-basierten Tissue Engineering Konstrukten. Dafür sollten humane aus dem Knochenmark stammende mesenchymale Stammzellen verwendet und tenogen differenziert werden und auf einem Kollagen-Scaffold oder als Sphäroid im Kollagen-Hydrogel kultiviert werden. Aussagen über eine mögliche Differenzierung sollten durch mikroskopische Untersuchungen und durch qPCR ermittelt werden.
Die Bildung von Sphäroiden sollte durch die Kultivierung im Hanging-Drop mit der Kultivierung in Mikrotiterplatten mit zellabweisender Oberfläche vergleichend untersucht werden. Dafür wurden neben mikroskopischen Untersuchungen, Färbemethoden und Gefriermikrotomschnitte herangezogen.
Als Positivkontrolle wurden humane Tenozyten (Sehnenzellen) verwendet.