Refine
Document Type
- Master's Thesis (2)
- Bachelor Thesis (1)
Language
- German (3)
Keywords
- SARS-CoV-2 (3) (remove)
Institute
Ein Maus-Infektionsmodell wurde genutzt um neutralisierende Antikörper gegen SARS-CoV-2 zu untersuchen. Nach Beendigung des Infektionsexperimentes wurden Lungen- und Gehirnpräparate fixiert und histologische Färbungen des SARS-CoV-2 Nukleokapsids und von Zellen der angeborenen Immunantwort vorgenommen. Der Nachweis von humanem ACE2 wurde untersucht und in Organhomogenaten bestätigt. Ein Bewertungsschema zur Validierung eingesetzter neutralisierender Antikörper wurde mit einer vergleichenden Hämatoxylin und Eosin Färbung erstellt und interpretiert.
In dieser Arbeit wurde das SARS-CoV-2 Nukleokapsid-Protein sowie dessen N- und C-terminale Domäne kloniert und die darauf folgende Expression in E.coli und die Aufreinigung optimiert. Anschließend wurden die Proteine als Antigene für indirekte ELISAs verwendet. Die IgG-Antwort aus Seren von COVID-19 Patienten wurde bestimmt, um die Sensitivität und Spezifität hinsichtlich der Detektionsfähigkeit gegenüber den Varianten des N-Proteins zu vergleichen. Weiterhin wurde das Verhalten dieser Immunantworten über einen Zeitraum der akuten Infektion bis frühen Konvaleszenz mit einem Zeitraum von bis zu 10 Monaten nach Symptombeginn bei verschiedenen klinischen Schweregraden untersucht.
Durch Eindringen in die Wirtszelle kann sich das SARS-CoV-2-Virus verbreiten. Das adaptive Immunsystem bildet verzögert die humorale Immunantwort durch hochspezifische Antikörper aus. Die Antikörper neutralisieren das SARS-CoV-2. Im Laufe der Immunabwehr steigen die Antikörpertiter der verschiedenen Antikörperklassen unterschiedlich an. Mittels Serumproben sollte herausgefunden werden, wie der IgG-Titer nach einem positiven PCR-Ergebnis von der Zeit abhängig verläuft und ob es Unterschiede zwischen verschiedenen Geschlechtern und Altersklassen gibt. Für die Ermittlung der IgG-Titer wurden einmal der ELISA mittels Generic Assays CoV-2 IgG und einmal der CLIA mittels LIAISON® SARS-CoV-2 TrimericS IgG angewandt. Zudem fand eine Vergleichsmessung der Tests statt.
Im Allgemeinen stieg der Titer innerhalb der ersten 50 Tage an, da sich in dieser Zeit die IgG-Antikörper ab Tag 14 bilden, und erreichte das Maximum im Bereich 40-50 Tage. Danach fiel der Titer leicht bis auf 60 -70 % des Maximums, da die Antikörper nach und nach absterben.
Die Vergleichsmessung ergab einen linearen Zusammenhang von 64 % zwischen Generic Assays und LIAISON®. Bezogen auf die qualitative Aussage der Tests gab es eine 96 % Übereinstimmung der Ergebnisse.